«Центр ветеринарной офтальмологии доктора Шилкина А.Г.» г.Москва.
Введение. В последние несколько лет в гуманитарной и ветеринарной медицине наблюдается взрывной рост интереса к новым клеточным технологиям. В ветеринарии этот интерес особенно ярко проявляется в быстром развитии различных методов лечения животных стволовыми клетками. Однако внедрение стволовых клеток в ветеринарную медицину имеет ряд серьёзных сдерживающих факторов, таких как:
Дороговизна метода
Непредсказуемость результатов
Длительность времени выращивания аутологичного материала
Отсутствие маркёров стволовых клеток для животных.
В настоящее время в гуманитарной медицине появился новый эффективный метод клеточной терапии – лечение плазмой, обогащенной тромбоцитами. Данная методика является безопасной (берётся собственная кровь), физиологичной, простой и она гораздо дешевле, чем стволовые клетки. Буквально за несколько лет, плазма обогащённая тромбоцитами стала широко применяться не только во многих областях медицины, но и быстро осваивается ветеринарными клиниками США.
Плазма обогащённая тромбоцитами широко применяется в гуманитарной косметологии, стоматологии, отоларингологии, пластической и челюстно-лицевой хирургии. В гуманитарной офтальмологии метод широкой распространенности не получил и используется единичными зарубежными и отечественными специалистами. В российской ветеринарной офтальмологии этот метод лечения ранее никем не описан. В зарубежной литературе присутствуют только ссылки на применение этого метода ветеринарными офтальмологами из США. С самими научными работами нам ознакомится так и не удалось.
Целью нашего исследования являлись: разработка методики лечения глазных заболеваний у собак и кошек с помощью плазмы обогащенной тромбоцитами.
Материалы и методы исследования. С помощью методики плазмы обогащённой тромбоцитами, нами было пролечено 28 глаз животных – 25 собак и 3 кошки с различными дистрофическими заболеваниями глаз:
- Собаки с синдромом сухого глаза – 15 глаз. Заболевание варьировано от начальной до терминальной стадии.
- Собаки с хроническими незаживающими эрозиями роговицы – 7 глаз.
- Терапия проводилась животным после операций по пересадке роговицы – 6 глаз (3 собаки и 3 кошки).
Возраст животных колебался от 6 месяцев до 15 лет.
Методы исследования. Передний отрезок глаза исследовали с помощью налобного биомикроскопа Heine (Германия) и щелевой лампы Shin Nippon (Япония).
Внутриглазное давление измерялось Tonovet и тонометром Маклакова.
Количество слезопродукции определялось тестом Ширмера.
Величина роговичной эрозии контрастировалась флюоресцином.
Состояние сетчатки и зрительного нерва визуализировались с помощью прямого и обратного бинокулярного офтальмоскопов.
Результаты собственных исследований.
Суть метода плазмы обогащённой тромбоцитами.
Плазма обогащённая тромбоцитами представляет собой плазму содержащую не менее 1 млн. тромбоцитов на 1 мл плазмы. То есть содержание тромбоцитов в этой плазме превышает физиологическую норму в 5 раз. Такая высокая концентрация тромбоцитов и обеспечивает их стимулирующий эффект за счёт запуска цитокиновых реакций и выделения множества факторов роста. При меньшей концентрации стимулирующий эффект тромбоцитов отсутствует.
Механизм действия метода.
В богатой тромбоцитами плазме находятся все основные 6 факторов роста:
Тромбоцитарный фактор роста PDGF
Трансформирующий фактор роста TGF
Инсулиноподобный фактор роста IGF
Фактор роста фибробластов FGF
Фактор роста эндотелия VEGF
Эпидермальный фактор роста
Эти цитокины являются ведущими в процессах клеточной дифференцировки, пролиферации и регенерации. При введении плазмы обогащённой факторами роста в патологический очаг происходит ускоренное восстановление повреждённых тканей, уменьшение воспалительных процессов и улучшение трофики непосредственно в очаге поражения.
Методика забора крови и центрифугирования.
Для лечения заболеваний в ветеринарной офтальмологии, нами была разработана методика применения плазмы обогащённой тромбоцитами. Суть её состоит в следующем. У животного производится забор крови из периферических вен в специальные пробирки для плазмолифтинга. Эти вакуумные пробирки созданы и запатентованы профессором P.P.Ахмеровым. Они содержат разделительный гель и имеют высокий уровень очистки плазмы от эритроцитарного сгустка. Пробирки с кровью устанавливаются в центрифугу ЕВА 20 (Hettich – Германия), которая разработана специально для быстрого разделения крови на фракции и рекомендуется всеми ведущими специалистами. Пробирки центрифугировались в течение 10 минут со скоростью 3,5 тыс. оборотов в минуту. После вращения кровь разделялась на 3 основные составляющие:
1. Верхний слой – бедная тромбоцитами плазма
2. Средний – самый тонкий слой – богатая тромбоцитами плазма
3. Нижний слой, находящийся под гелем – эритроциты.
Богатая тромбоцитами плазма извлекалась из пробирки с помощью шприцевой иглы. Затем после местной анестезии животному проводилась субконъюнктивальная инъекция чистой плазмы в верхний сегмент конъюнктивы. Количество вводимой плазмы составляло 0,5-1 мл. Так же плазма закапывалась в конъюнктивальную полость от 3 до 6 раз в день, сроком на 3-10 дней, в зависимости от патологии. При инстилляциях для разрыва тромбоцитов и освобождения факторов роста использовалось небольшое количество хлористого кальция. Нами было выявлено следующее: субконъюнктивальные инъекции плазмы полностью безопасны. Они не вызывают токсических, аллергических или местно-раздражающих реакций со стороны глаза и организма в целом.
Инстилляция в полость глаза плазмы с добавлением хлористого кальция представлялась нам не безопасной и вызывала определённые опасения. Однако оказалось, что при незначительном содержании хлористого кальция в плазме (до 0,1 мл на 1 мл плазмы) он не наносит никаких побочных действий и не имеет местных токсических, аллергических и раздражающих реакций, даже при длительном применении.
Заключение. Таким образом, метод применения плазмы обогащённой тромбоцитами в ветеринарной офтальмологии показал свою физиологичность, безопасность, отсутствие токсических реакций и местно-аллергических осложнений. Его клиническая эффективность и обсуждение результатов лечения описаны ниже в следующей статье.
Summary
Platelet rich plasma (PRP) - the new effective method of treatment of eye diseases in dogs and cats.
Shilkin A.G., Rotanov D.A., Pavlova T.N., Novikova K.A.
"Center of Veterinary Ophthalmology Dr. Shilkina A.G.» in Moscow.
In this article describes the development of a method of treatment of eye pathologies plasma platelet rich and methods of its receipt. As highlighted a number of diseases with the use of the PRP and the possible methods of introduction of plasma in the eye. In the course of the research method we have proved by the absence of toxic and allergic reactions, which speaks about the big prospects of development of this method.
